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項(xiàng)目檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室高效液相色譜測(cè)定雞蛋中的三聚氰胺

發(fā)布時(shí)間：2019-03-26 17:22:27

用三氯乙酸溶液提取雞蛋和雞蛋粉中三聚氰胺的同時(shí),也去除了蛋白質(zhì)的干擾,樣液經(jīng)MCX固相萃取柱分離、高效液相色譜分離和質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)。在2～200μg/kg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好,r=0.9999。檢出限（LOD）為2μg/kg,定量限（LOQ）為10μg/kg。在10～100μg/kg的添加水平范圍內(nèi)的平均回收率為81.8%～94.9%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.93%～4.77%。方法有良好的精密度和重現(xiàn)性,適用于雞蛋和雞蛋粉中低含量的三聚氰胺檢測(cè)。
一，實(shí)驗(yàn)原理試樣中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，提取液離心后經(jīng)混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱凈化，洗脫物吹干后用流動(dòng)相溶解，用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。

二，實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
1、試劑 ①甲醇：色譜純。 ②乙腈：色譜純。 ③氨水：濃度25％～28％。 ④混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱：60mg，3mL。 ⑤三氯乙酸溶液(10g/L)：稱(chēng)取10g三氯乙酸，加水至1000mL。 ⑥氨化甲醇溶液：準(zhǔn)確量取5mL氨水和95mL甲醇，混勻后備用。 ⑦乙酸鉛溶液(22g/L)：取22g乙酸鉛，用約300mL水溶解后定容至lL。 ⑧濾膜：0.45μm，有機(jī)相。 ⑨甲醇水溶液：50mL甲醇加入50mL水，混勻。 ⑩離子對(duì)試劑緩沖液：稱(chēng)取2.02g庚烷磺酸鈉和2.10g檸檬酸于1L容量瓶中，加水溶解稀釋至刻度。三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品：純度＞99％。
A．三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取lOOmg(精確到0.1 mg)的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇水溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，該溶液濃度為lmg/mL，于4℃避光保存，有效期3個(gè)月。
B．三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)中間液：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5.OOmL，于50mL容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇水溶液定容至，50mL，該溶液i聚氰胺濃度為lOOμg/L，于4℃避光保存，有效期1個(gè)月。
C．三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液：用流動(dòng)相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)中間液逐級(jí)稀釋得到濃度為1．0μg/mL，5.0μL/mL，10μg/mL，25μg/mL，50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
2、儀器 ①高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。 ②離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。 ③渦旋混合器。 ④超聲波清洗器。 ⑤氮?dú)獯蹈蓛x。 ⑥同相萃取裝置。
三，實(shí)驗(yàn)步驟
1、提取稱(chēng)取2.00g試樣置于50mL具塞離心管中，準(zhǔn)確加入20mL三氯乙酸溶液(10g/L)，加入 2mL乙酸鉛溶液(22g/L)，搖勻，超聲提取20min。靜置2min，以不低于4000r/min離心10min，上層液待凈化。
2、凈化分別用3mL甲醇，3mL水活化混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱，準(zhǔn)確移取10mL離心液分次上柱，控制過(guò)柱速度在1mL/min以?xún)?nèi)。依次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脫。洗脫液500C下氮?dú)獯蹈?，殘留物?mL流動(dòng)相定容，渦旋混合1min，過(guò)微孔濾膜后，供HPLC測(cè)定。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。
3、高效液相色譜條件 ①色譜柱：C8柱，柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒度5μm；或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。 ②柱溫：室溫。 ③流動(dòng)相：離子對(duì)試劑緩沖液-乙腈(90:10)，混勻。 ④流速：1.0mL/min。 ⑤檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm。 ⑥進(jìn)樣量：20μL。
四、結(jié)果處理：X——試樣中l(wèi)一聚氰胺的含量，mg／kg； A——樣液中三聚氰胺的峰面積，積分單位； c——標(biāo)準(zhǔn)溶液中j聚氰胺的質(zhì)量濃度，μg/mL； V——樣液最終定容體積，mL； As——標(biāo)準(zhǔn)溶液中三聚氰胺的峰面積，積分單位； m——試樣的質(zhì)量，g； f——稀釋倍數(shù)。
五、注意事項(xiàng)
1、本方法的定量限為2mg/g。
2、回收率：在添加濃度2mg/kg～lOmg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在80％～110％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10％。
3、精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10％。

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